异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷

IPTG 

IPTG　　中文品名: 异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷 　　商品名称: Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside 　　英文简称: IPTG 　　产品别名: Isopropyl β-D-Thiogalactoside 　　通用CAS : 367-93-1 　　产品纯度: Sigma ≥99%, Merck ≥98% ，INALCO≥99% 　　产品性状: 白色或白色粉末,溶于水后呈清亮无色液体 　　分 子 式: C9H18O5S 　　分 子 量: 238.30 　　保存温度: 2-8°C冷藏保存，配制好后保存于-20°C，室温可放置一个月 　　主要作用：异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,不被细*代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。 　　IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性，当pUC系列的载体DNA（或其他带有lacZ 基因载体DNA）以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互补性，可以根据是否呈现白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑选出基因重组体。此外，它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。编辑本段诱导原理首先

　　E.coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节 基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子（元）受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解（代谢）物基因激 活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表 达 。

其次

在没有乳糖存在时，lac操纵子（元）处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结 合，抑制转录起动。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被诱导。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经β-半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用与半乳糖相同，是一 种作用极强的诱导剂，不被细*代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。编辑本段使用方法　　首先把IPTG配制成23.83 mg/ml（100 mM）的水溶液，并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂培养基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。当DNA片段插入*pUC系列载体（或其他带有lacZ、Amp基因载体），然后转化*lacZ缺失细胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基，可根据长出菌体的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体（白色为具有DNA插入片段的基因重组体）。

作用　　诱导外源基因的表达，普遍应用于原核表达系统，使其表达量增高，产物稳定，具有易鉴定，易纯化的优点。