IPTG 【367-93-1】 科研用途介绍

大家都知道IPTG【CAS:367-93-1】在生物实验室的用途非常广泛，那么这个在生化研究领域，这个人人知晓的IPTG到底有哪些用途呢？下面小编为大家介绍下吧！
1.IPTG主要用作诱导剂，诱导蛋白表达，诱导乳糖操纵子表达。
2.IPTG通常和X-GAL【CAS：7240-90-6】一起搭配使用，用于蓝白菌落的筛选。
3.IPTG也用在发酵提取，细胞培养中。
4.IPTG还可以用在疫苗研发、大肠杆菌表达目标蛋白、细胞重组表达等研究中。

IPTG诱导原理
首先
E. coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、渗透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节 基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子（元）受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解（代谢）物基因激 活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达 。
其次
在没有乳糖存在时，lac操纵子（元）处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录启动。当有乳糖存在时，lac操纵子（元）即可被诱导。在这个操纵子（元）体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经β-半乳糖苷酶催化，转变为异乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用与异乳糖相同，是一 种作用极强的诱导剂，不被细*代谢而十分稳定，因此被实验室广泛应用。

使用方法
首先把IPTG配制成23.83 mg/ml（100 mM）的水溶液，并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂培养基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。当DNA片段插入*pUC系列载体（或其他带有lacZ、Amp基因载体），然后转化*lacZ缺失细胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基，可根据长出菌体的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体（白色为具有DNA插入片段的基因重组体）。
 
作用
诱导外源基因的表达，普遍应用于原核表达系统，使其表达量增高，产物稳定，具有易鉴定，易纯化的优点。
 
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